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 摘 要 研究基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)的抑瘤作用,给皮下接种S180瘤细胞的小鼠,每天分别ig及ipRAPC13.4mg/kg,6.7mg/kg和3.4mg/kg,共10d,第11d处死小鼠,称瘤重和胸腺重,计数白细胞。结果表明,RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用,瘤重抑制率在45%~64%之间,ig及ip均有效,对荷瘤小鼠的胸腺指数和白细胞数量无明显影响。
  关键词 基因重组别藻蓝蛋白;S180肉瘤;白细胞;胸腺

Elementary Study of Recombinant Allophycocyanin(RAPC)
on S180 Tumor in Mice
Tang Shuming,Huang Fang,Dou Changgui,Zhuang Guixia,
Qin Song1,Wang Xihua1,Zhou Lihong1
(China Pharmaceutical University,Nanjing 210038;
1Institute of Oceano logy,the Chinese Academy of Sciences,Qingdao 266071)

Abstract The mice were infecfed by S180, then treated with Recombina nt Allophycocyanin(RAPC) ig or ip 13.4mg/kg,6.7mg/kg and 3.4mg/kg per day respectively for ten days.The animal were killed, tumor clot or thymus were wei ghed and the leukocyte were counted.The results sho wed that RAP C could decrease weight of tumor significatly.The inhibitory rate ranged from 45% to 64% and had no obvious effect on Thymus Index and leukocyte count.
Key Words RAPC(recombinant allophycocyanin), S180 tumor,WBC, Thymus.

  藻胆蛋白(Phycobiliprotein)是某些藻类特有的重要蛋白质,主要包括藻蓝蛋白、藻红蛋白和别藻蓝蛋白三类,其抗癌、抗放射及促进造血功能的作用,国内外均有研究[1~4]。但从天然藻类提取、纯化藻胆蛋白,工艺复杂,含量不稳定。中国科学院海洋研究所与美国加州大学合作,成功地克隆了钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)别藻蓝蛋白的基因,并通过构成融合蛋白的方式,实现了在大肠杆菌中的高效表达,以此生产高纯度别藻蓝蛋白(Recombinant Allophycocyanin,RAPC)。本文用动物移植性肿瘤,研究RAPC的抑瘤作用。

1 材 料
1.1 药物
基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)由中国科学海洋研究所秦松博士提供,系基因工程产品经提取、纯化的别藻蓝蛋白水溶液,浓度0.67mg/ml,冰冻保存,临用时解冻,以蒸馏水稀释至所需浓度,小鼠灌胃或腹腔注射(以生理盐水稀释)容积均按体重为0.2ml/10g,剂量按预试验结果确定。环磷酰胺(CY),上海第12制药厂。
1.2 动物
ICR小鼠,18~20g,雄性
,中国药科大学实验动物中心提供,合格证号:苏动(质)字93021号。S180肉瘤瘤株移自江苏省肿瘤研究所,本室传代,在无菌操作下,每鼠右前腋窝部皮下接种瘤细胞悬液0.2ml(镜检含瘤细胞数9.23×107个/ml)。

2 方 法[5]
小鼠接种瘤细胞次日
,按体重随机分5组,每组10只,于接种后24h给药。大、中、小3个剂量给药组分别igRAPC13.4mg/kg,6.7mg/kg和3.4mg/kg。阳性对照igCY20mg/kg,空白对照组ig生理盐水,均以0.2ml/10g等容积灌胃,连续10d。末次给药后24h,小鼠称重,眼眶取血,作白细胞计数;脱颈椎处死,剥取瘤块,分离、摘取胸腺,电子天平称湿重,计算瘤重抑制率和胸腺指数。

3 结 果
抑瘤作用及胸腺指数见表1、表2。

Tab l Effects of RAPC on tumor weigh tin mice

GroupsAnimal
number
Dose(ig)
(mg/kg.d)
Tumor we ight
(g,x.gif (73 字节)± S)
Inhibitory rate
(%,x.gif (73 字节))
Control10
2.244±0.569
CY1020.0×100.656±0.241***70.8
RAPC1013.4×100.895±0.372***60.1
RAPC10 6.7×100.942±0.431***58.0
RAPC10 3.4×101.216±0.422***45.8
  All data were analyzed by t-test compared to control   ***P<0.01

Tab 2 Effects of RAPC on Leukocyte count and Thymus Index in mice

GroupsAnimal
number
Dose
(mg/kg.d)
WBC 
(×109/L,x.gif (73 字节)±S)
Thymus index
(mg/kg,x.gif (73 字节)±S)
Control10
8.7±1.322.67±0.68
CY1020.0×106.2±0.46***1.23±0.24***
RAPC106.7×109.4±1.43***2.57±0.52* 
RAPC103.4×108.6±1.22***2.35±0.46*

  Compared with control  *P>0.05, ***P<0.01

  另批实验, 采用腹腔注射给药, 结果见表3。

Tab 3 Effects of RAPC on tumor weight tumor in mice

GroupsAnimal
number
Dose(ip)
(mg/kg.d)
Tumor weight
(g,x.gif (73 字节)±S)
Inhibi tory rate
(%,x.gif (73 字节))
Control10
2.314±0.526
CY1020.0×100.581±0.234***74.9
RAPC10 6.7×100.826±0.421***64.3
RAPC10 3.4×101.182±0.483***48.9
  Compared with control    ?***P<0.01

  由表1~3可见,RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用,剂量13.4mg/kg,6.7mg/kg和3.4mg/kg的瘤重抑制率分别在45%至64%之间,灌胃及腹腔给药均有效,对荷瘤小鼠的白细胞数量和胸腺指数均无明显影响。

4 结 语
试验结果表明,RAPC对小鼠S180肉瘤具有显著抑制作用,并且不具有化疗药(CY)对白细胞和胸腺的毒副反应,因而对实体瘤的治疗应用具有良好的前景,值得深入研究。

中国生物工程中心“九五”攻关项目编号96-C02-04-03

作者单位:唐书明 黄芳 窦昌贵 庄桂霞(中国药科大学海洋药物中心,南京
210038);
邹立红 秦松 王希华(中国科学院海洋研究所,青岛266071)

参考文献
1 张成武,殷志敏,欧阳平凯.藻胆蛋白的开发与利用.中国海洋药物杂志,1995,14(3):52
2 蔡心涵,何立明,蒋家伦,等.螺旋藻藻蓝蛋白对癌激光疗法增敏作用的实验研究.中国海洋药物杂志,1995,14(1):15
3 张成武,曾昭琪,张媛贞,等.钝顶螺旋藻多糖和藻蓝蛋白对小鼠急性放射病的防护作用.营养学报,1996,18(3):327
4 Shinohara K,Okura Y,Koyano T,et al.Algal phycocyanins promote growth of human cells in culture. (Food Prot Preserv Div, Na tl Food Res Inst,Tsukuba Japan 305) In vitro cell DevBiol,1988, 24 (10):1057
5 徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫 生出版社,1994.1432